名  稱：25(OH)D3 ELISA試劑盒（酶聯免疫檢測法）

規  格：96T/48T

說明書：48孔配置一份/96孔配置一份

用  途：僅供使用

服  務：多年代測服務，質量保證

品　牌：酶聯生物

操作步驟：

1．取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。

2．分組：取出96孔板，根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數，把剩余的板條繼續冷藏處理，分別設標準品組（6個濃度）、空白孔、待測樣品組。

注：為減少實驗誤差，保證準確性，建議設置復孔。

3．加樣：依照標準品的順序分別加入50ul的標準品溶液于空白微孔中，空白對照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中加入50ul的待測樣本。

4．加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入100ul的酶標溶液（空白對照孔除外）。

5．溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內于37℃恒溫孵育1小時。

6．洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標板5次，用吸水紙*拍干。

7．顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。

8．終止：25-37℃下避光反應10-15分鐘，加入50ul終止液。

9．讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值。

實驗規則：

1、要保證移液槍的準確性，誤差不能超過2%，可用水和電子天平進行確定，但有專業人員進行矯正。

2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支，吸取不同的液體后，要更換槍頭，即使是吸取標準品時。

3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復到室溫，以使結果更穩定。

4、實驗時，要使底物避光保存。

5、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。

6、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

7、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。

8、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體，也可以用酶標儀的晃動功能。

9、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發。

10、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*，沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。

11、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液，加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

12、底物是光敏感的，要在臨用前現配。

13、檢測前，要打開酶標儀，使之穩定10分鐘以上。

14、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。

15、待檢樣品要澄清，否則會影響結果。

16、溫浴時間應遵守試劑盒規定。

17、應盡量做雙孔實驗，這樣才能保證數據的準確性。

18、對結果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。

25(OH)D3 ELISA試劑盒（酶聯免疫檢測法）由上海酶聯生物提供，包括25(OH)D3 ELISA試劑盒說明書，酶聯免疫檢測

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